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第二十二章 感染性疾病与感染免疫检测

第一节 细菌感染性疾病的免疫检测

临床上最为常用的是病原体抗原检测和宿主血清抗体检测。患者样本中若有病原体抗原检出,即可表明有该病原体的存在;病原体感染机体时可诱导产生相应的抗体,特异性抗体的检出是临床诊断的重要依据。一、链球菌感染 (一)链球菌 链球菌感染最常用的免疫学实验室检查是抗链球菌溶血素“O”(ASO)检测。 临床上常采用胶乳凝集试验、免疫散射比浊法检测ASO。 ASO增高常见于急性咽炎等上呼吸道感染、风湿性心肌炎、心包炎、风湿性关节炎和急性肾小球肾炎。 (二)猪链球菌 猪链球菌的实验室检查有细菌培养、鉴定和免疫学检测等方法。 分子诊断技术是鉴定分型诊断方法,常用于猪链球菌的快速诊断以及流行病学调查。免疫学技术主要应用患者血清学鉴定。 二、伤寒沙门菌感染 沙门菌可致多种感染,轻者为自愈性胃肠炎,重者可引起致死性伤寒。 伤寒沙门菌感染的实验室诊断主要依赖于免疫学检测方法。 1.肥达反应 伤寒沙门菌有菌体(O)抗原、鞭毛(H)抗原和表面(Vi)抗原,三者的抗体均非保护性抗体。由于(O)与(H)抗原的抗原性较强,故常用于作血清凝集试验(肥达反应)辅助临床诊断。产生凝集时抗体效价≥1:80为阳性,或双份血清效价呈4倍以上增长,结合流行病学资料可以作出诊断。 2.酶联免疫吸附试验(ELISA) 可用于检测伤寒沙门菌的抗原和抗体。 目前有:①以伤寒沙门菌脂多糖(内毒素的主要成分)为抗原,用间接ELISA法检测伤寒患者血清中特异性IgM抗体,该方法有助于伤寒的早期诊断。②以高纯度的伤寒沙门菌Vi抗原包被反应板,采用ELISA法测定患者血清中的Vi抗体,有助于检出伤寒带菌者及慢性带菌者。 三、结核分枝杆菌感染 结核分枝杆菌感染的免疫学方法有:1.结核菌素试验(tuberculin test) 包括针对旧结核菌素(old tuberculin,OT)与结核菌素纯蛋白衍生物(purified protein derivative,PPD)两种菌体蛋白。 2.分枝杆菌抗体检测 以分枝杆菌外膜抗原为已知抗原,检测待测血清中的分枝杆菌抗体。可采用胶体金方法进行。需注意的是,其他分枝杆菌感染、麻风病也可呈阳性。 3.全血干扰素测定法 当全血与PPD和对照抗原(植物血凝素)共同孵育后,致敏的淋巴细胞可分泌IFN-γ,通过检测IFN-γ的含量来鉴定菌种。本试验所得结果与结核菌素试验相当,且具有受BCU接种史影响小、又能与非结核分枝杆菌进行区分的优点,同时还可避免结核菌素试验在操作上与结果判断上存在的多种主观或人为因素的影响。

第二节 真菌感染性疾病的免疫检测

一、深部真菌感染 (一)念珠菌感染 (二)隐球菌感染 (三)曲霉感染 (四)真菌感染的免疫学检测二、类真菌感染 卡氏肺孢菌,又称卡氏肺孢子虫,为类真菌。 目前病原诊断主要依靠形态学检查,呼吸道分泌物或肺活检组织切片染色见肺泡内泡沫状嗜伊红物质中富含本病原体。支气管灌洗术和支气管肺活检时本病原体发现率可达90%。近年来,ELISA和胶乳微粒凝集试验被用于检测抗原抗体和相应抗原,同时分子生物学技术(如PCR)也被用于快速早期诊断。

第三节 病毒感染性疾病的免疫检测

一、流感病毒感染 (一)流感病毒免疫学检测主要包括:1.病毒的抗原检测 常采用免疫荧光或酶标记技术,以标记的特异性抗体检测鼻咽分泌物中的流感病毒抗原。 2.病毒的抗体检测 ①血凝抑制试验或补体结合试验可以检测急性期和恢复期患者血清总抗体效价,效价4倍升高有助于回顾性诊断和流行病学调查,但不能用于早期诊断。②时间分辨免疫荧光技术检测流感病毒抗原。 (二)禽流感病毒AIV感染的免疫学诊断主要包括对 AIV特异性IgM和IgG抗体的检测。检测方法包括:禽流感血凝抑制试验、神经氨酸抑制试验、琼脂免疫扩散试验、ELISA法及抗体斑点。ELISA(Dot-ELISA)法等。二、轮状病毒感染免疫学诊断包括:1.RV抗原检测 用 ELISA或者免疫酶斑点试验从粪便标本中检测RV抗原,如果结果阳性则可诊断为RV感染。如用单克隆抗RV抗体检测,灵敏度可大大提高,可用于患者诊断和疫情诊断。 2.抗体检测 可采用ELISA法检测血清中特异性IgM、IgG抗体,通常RV感染5天后患者血清中即可测出IgM抗体水平的升高,因此可用于临床轮状病毒感染的早期诊断。IgG抗体的检测常采用发病早期和恢复期双份血清进行,如有4倍以上的增长则有诊断意义。 三、肝炎病毒感染 (一)甲型肝炎病毒感染 甲型肝炎的实验室诊断主要依赖对血清中特异性抗体的检测,抗原检测、病毒分离及分子诊断技术未作为常规诊断方法。 通常采用ELISA和化学发光技术对HAV IgG及IgM进行检测。HAV IgM是感染的特异性标志,有助于区分现症感染和既往感染 。HAV-IgM在急性感染时出现较早(发病后1~4周,上升快,高峰效价高,持续时间短(常于3~6个月后转阴性),是急性HAV感染或者复发的可靠指标。HAV-IgG-般于感染后4周出现,24周达高峰,可维持多年,甚至终生。 (二)乙型肝炎病毒感染1.乙型肝炎表面抗原 血清HBsAg的检测可采用固相放射免疫法、ELISA、反向间接血凝试验等方法,是乙型肝炎患者早期诊断的重要指标。目前可以采用化学发光法对血清中的HBsAg进行定量检测,这对肝炎患者动态疗效观察很有价值。 2.乙型肝炎病毒表面抗体 目前常用的检测方法是固相放射免疫法和ELISA法 (1)抗-HBs阳性提示急性感染后的康复。 (2)衡量预防接种效果的最主要指标。 3.乙型肝炎病毒e抗原 (1)HBeAg阳性是乙肝传染性的标志,在急性乙型肝炎早期常有HBeAg的检出。 (2)乙型肝炎感染早期,HBeAg与HBsAg同时阳性可能性较大;HBeAg阳性尚和HBVDNA复制、肝脏损害程度相关。HBeAg阳性标志着患者有较强的传染性。 4.乙型肝炎病毒e抗体 (1)抗-HBe多出现于急性肝炎恢复期的患者。 (2)乙型肝炎病毒e抗原的血清学转换,即HBeAg含量消失同时伴抗-HBe的出现,是目前临床上慢性乙型肝炎治疗的近期目标(最初目标是减少乙型肝炎病毒的DNA复制,对临床个体化治疗有重要的指导意义。 5.乙型肝炎病毒核心抗原 (1)作为乙肝传染性、活动性病变的标志HBsAg、HBeAg、抗-HBc等指标是体内存在乙型肝炎病毒颗粒的间接标志,而HBcAg则是乙型肝炎病毒存在的直接标志,HBcAg与HBV复制呈正相关,可反映HBV的活动性及复制程度。 (2)有助于乙肝病情、疗效和预后的判断。 (3)有助于区分慢性活动性或非活动性肝炎。 6.乙型肝炎病毒核心抗体-IgM (1)急性乙肝的诊断:抗-HBe-IgM是早期HBV感染的特异性血清学标志。 (2)预后判断。 (4)急性重型乙型肝炎诊断。 7.乙型肝炎病毒核心抗体-IgG8.乙型肝炎病毒前S1抗原乙型肝炎病毒(HBV)外膜蛋白包括S、前S2和前S1三种成分。9.乙型肝炎病毒前S2抗原pre-S2抗原上具有一个高免疫性的抗原决定簇和多聚蛋白受体(PHSA-Re),它与HBV的感染和复制有密切的关系,并对临床早期诊断、了解预后及制备乙肝高效疫苗有重要意义。 (三)丙型肝炎病毒感染 丙型肝炎病毒感染的实验室检查主要包括免疫学及分子生物学检测。针对特异性抗体HCV-IgG和HCV-IgM的免疫学检测是临床常用的诊断方法。HCV-IgM阳性可作为HCV活动性复制的血清学标志,且常与慢性丙肝患者的急性发作有关。 (四)丁型肝炎病毒感染1.抗HDV-IgM的检测 常用捕获法ELISA。 在HDV急性感染时,抗HDV-IgM是首先可以检出的抗体,尤其是在同步感染时,抗HDV-IgM往往是唯一可检出的HDV感染的血清学标志物。2.抗HDV-IgG的检测 常采用竞争抑制法。 抗HDV-IgG出现在抗HDV-IgM下降之际。在慢性HDV感染中,其IgG抗体保持高滴度,即使HDV感染终止后仍可存在数年。 (五)戊型肝炎病毒感染HEV-Ab检测:HEV-IgM出现和消失均较早,持续时间短,是HEV急性感染的诊断指标。 HEV-IgG也可作为HEV急性感染的一项辅助指标。 四、冠状病毒感染1.免疫荧光技术用于检测血清中的IgM抗体,大约在疾病开始后的10天出现阳性结果。该方法也可用于IgG抗体的测定。 2.ELISA技术 可用于SARS患者血清中IgM和IgG抗体混合物的测定,大约在疾病开始后的21天出现可靠的阳性结果。感染早期,上述抗体有可能无法测出。检测阳性提示既往的病毒感染。急性期到恢复期的阳转或者是抗体效价的4倍增长,提示有近期感染。 TORCH:弓形虫、巨细胞病毒、风疹病毒、单纯疱疹病毒。

第四节 先天性感染的免疫检测

一、弓形虫感染1.循环抗原(CAg)检测2.特异性抗体检测 TOX IgM主要用于急性感染的诊断,TOX IgG则用于既往感染的诊断。 二、风疹病毒感染1.RUV总抗体效价常采用血凝抑制试验、中和试验或补体结合法来进行。 2.RUV IgG检测 3.RUV IgM检测 常采用ELISA方法。 三、巨细胞病毒感染1.HCMV抗原检测 ①早期抗原免疫荧光检查(DEAFF):是在传统的细胞培养的基础上发展起来的早期快速诊断技术。 ②HCMV抗原血症诊断:可帮助早期诊断免疫抑制或免疫缺陷患者的活动性HCMV感染。该方法直接定性或定量检测外周血白细胞中HCMV抗原的表达,一般在活动性感染前1周即出现阳性。 2.HCMV抗体检测 通过检测血清中特异性IgG和IgM抗体,诊断HCMV的感染。HCMV IgM阳性提示有活动性感染。 常用的检测方法包括:补体结合试验、间接血凝试验、免疫荧光试验、免疫印迹试验 、ELISA及放射性免疫试验。 四、单纯疱疹病毒感染 单纯疱疹病毒感染是由单纯疱疹病毒(HSV)所致。HSV可分为HsV-1和HSV-2两个亚型。1型主要引起生殖器以外的皮肤、黏膜(如口腔黏膜)和器官(如脑)的感染。2型主要引起生殖器部位皮肤黏膜的感染。HSV感染的实验室检查主要依赖免疫学方法,包括HSV Ag、HSV IgM和HSV IgG。 1.HSV抗原检测 采用HSV特异性单克隆抗体,以免疫荧光或ELISA方法直接检测患者组织或分泌物中的HSV抗原。若为阳性则提示为近期感染。 2.HSV抗体检测 是临床上用来检测HSV感染的一种最常见手段。主要采用间接免疫荧光法和ELISA法检测特异性HSV IgM和IgG抗体。 HSV-IgM抗体阳性以及急性期和恢复期双份血清HSV-IgG抗体效价增高4倍以上,提示近期有HSV感染。HSV IgM是感染早期的诊断指标。

第五节 寄生虫感染的免疫检测

一、疟原虫感染 确诊疟疾有赖于显微镜检疟原虫 1.抗原的检测 2.抗体检测 ①间接荧光抗体试验:是目前国内外应用最为广泛的一种检测方法。 ③ELISA法. ④斑点免疫结合试验:包被抗原为恶性疟原虫可溶性抗原。 ②间接红细胞凝集试验:这种方法测定的抗体只有属特异性,因此一般多采用诺氏疟原虫作为抗原。血清效价大于1:16时具诊断意义。 二、血吸虫感染1. 环卵沉淀反应(COPT) 2.间接红细胞凝集试验(IHA) 3.乳胶凝集试验(LA) 4.ELISA 5.酶联免疫印迹技术 三、丝虫感染 丝虫感染的免疫实验室检查主要是ELISA法检测丝虫抗体。 以微丝蚴作为固定抗原,检测待测血清中的特异性抗体。 四、华支睾吸虫感染 华支睾吸虫病(clonorchiasis)又称肝吸虫病,是由华支睾吸虫寄生在人的肝胆管内所引起的以肝胆病变为主的一种人畜共患寄生虫病。 目前华支睾吸虫感染的临床免疫学实验室检测常采用Dot-ELISA法检测其特异性抗体,其敏感度、特异性较高。 五、猪囊尾蚴感染 猪囊尾蚴病俗称“囊虫病”,是猪带绦虫的幼虫寄生人体各组织所致的疾病。 1.抗体检测 2.循环抗原检测

2018-03-06 19:13:08   12
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